微生物鑒定程序
發(fā)布時間：
2022-12-27
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微生物鑒定程序
1、微生物鑒定
微生物鑒定是指借助現(xiàn)有的分類系統(tǒng),對未知微生物進行特征測定,遵循逐步縮小范圍的原則,將微生物進行細菌、酵母菌和霉菌大類的區(qū)分,或?qū)?、種及菌株水平確定的過程.
微生物鑒定應依據(jù)分類學知識,需達到的水平視情況而定,包括種、屬鑒定和菌株分型.大多數(shù)非無菌藥品生產(chǎn)過程和部分無菌生產(chǎn)環(huán)境的風險評估中,對所檢出微生物的常規(guī)特征包括菌落形態(tài)學、細胞形態(tài)學(桿狀、球狀、細胞群、孢子形成模式等)、革蘭染色或其它染色法及能夠給出鑒定結論的關鍵生化反應(如氧化酶、過氧化氫酶和凝固酶反應)進行分析,一般即可滿足需要；非無菌產(chǎn)品的控制菌檢查一般應達到種屬的水平；無菌試驗結果陽性和無菌生產(chǎn)模擬工藝（如培養(yǎng)基灌裝）失敗時,對檢出的微生物鑒定至少達到種屬水平,必要時需達到菌株水平.
2、微生物的鑒定程序
a、菌株的分離純化
微生物鑒定的第一步是進行菌株的分離純化,以獲取待檢菌的純培養(yǎng)物（單個菌落）.最常用的分離純化方法是平板劃線法.挑取待檢菌在適宜的固體培養(yǎng)基上連續(xù)劃線,劃線的形式有多種,常用的為四區(qū)劃線法,即將一個平板分成四個不同面積的小區(qū)進行劃線,第一區(qū)(A區(qū))面積最小,作為待分離菌的菌源區(qū),第二和第三區(qū)(B、C區(qū))是逐級稀釋的過渡區(qū),第四區(qū)(D區(qū)),則是關鍵區(qū),使該區(qū)出現(xiàn)大量的單菌落以供挑選純種用,平板上四區(qū)面積的分配應是D＞C＞B＞A.必要時可進一步進行純培養(yǎng),為表型鑒定和隨后的鑒定程序提供足夠量菌體.
b、初篩試驗
常規(guī)的微生物鑒定,一般要先對待檢菌做初步分類,即進行初篩試驗確定待檢菌的基本微生物特征.常見的初篩試驗包括細胞形態(tài)觀察、革蘭氏染色、芽孢染色、鏡檢觀察染色結果和生化反應等.
c、表型微生物鑒定
表型微生物鑒定是依據(jù)表型特征的表達來區(qū)分不同微生物間的差異,以微生物細胞的形態(tài)和習性表型為主要指標,通過比較微生物的菌落形態(tài)、理化特征和特征化學成分與典型微生物的差異的進行鑒別.
d、基因型微生物鑒定
與表型特征不同,微生物基因型通常不受生長培養(yǎng)基或分離物活性的影響,只需分離到純菌落便可用于分析.