微生物實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)際操作詳解
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
微生物檢驗(yàn)操作介紹
微生物試驗(yàn)的目的
制藥廠/食品廠/醫(yī)院臨床 監(jiān)督生產(chǎn)、保障安全 假陽(yáng)性率低、無(wú)假陰性
科研 篩分菌株、探索功能 特征典型
樣液準(zhǔn)備
目的：將樣品中的細(xì)菌擴(kuò)散至稀釋液或增菌液中。
材料：量器、稀釋液或增菌液、無(wú)菌均質(zhì)袋、均質(zhì)器
稀釋操作
菌落計(jì)數(shù)可信域：30~300CFU
稀釋的目的：通過(guò)稀釋使平板計(jì)數(shù)菌落在可信域內(nèi)、MPN計(jì)數(shù)或其它。
使用試劑：0.85%NaCl (生理鹽水)、 (磷酸鹽緩沖液)
方法：10倍稀釋
25g(ml)+225ml稀釋液
10g（ml）+90ml稀釋液
1g（1ml）+9ml稀釋液
MPN計(jì)數(shù)
9管法
稀釋:稀釋樣液，得到3個(gè)連續(xù)梯度
接種:每個(gè)梯度接種3支測(cè)定培養(yǎng)基管中（如LST、乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基）
培養(yǎng)
觀察結(jié)果
驗(yàn)證試驗(yàn)
計(jì)算
劃線目的
分離：將樣液中的細(xì)菌根據(jù)不同的特征最大限度的區(qū)分開
純化：挑取單菌落劃線，擴(kuò)大單一某細(xì)菌的數(shù)量，以用于鑒定、保存
挑取菌液：視菌液濃度
挑去菌落：肉眼可見即可
根據(jù)菌落特性及接種環(huán)菌含量采取一區(qū)、兩區(qū)、三區(qū)、四區(qū)、交叉等不同方法，得到大量單菌落為宜
分區(qū)劃分法：第一區(qū)劃線，滅菌接種環(huán)，第二區(qū)劃線，滅菌接種環(huán)，第三區(qū)劃線，滅菌接種環(huán)
穿刺接種
用于半固體、斜面接菌或霉菌接菌
使用接種針：即原始接種絲，不做環(huán)
使用接種針挑取菌落或蘸取菌懸液
半固體：垂直向下穿刺至培養(yǎng)基深度的1/2~2/3
斜面：垂直穿刺至底層培養(yǎng)基1/2~2/3后在斜面中央拉一直線，再交叉劃線
霉菌等：點(diǎn)接，挑取菌落后在平板上直接穿刺接種
傾注
目的：用于計(jì)數(shù)
介紹：潔凈無(wú)菌平皿—中央加入待檢液1ml—傾注44.5度培養(yǎng)基—搖勻—凝固—選擇覆蓋—凝固—倒置培養(yǎng)—計(jì)數(shù)
關(guān)鍵：稀釋（均勻）、加液（誤差，迸濺）、搖勻（片狀）、計(jì)數(shù)（特征、大?。?/span>
覆蓋的目的是為了防止菌落蔓延
涂布
目的：分離、計(jì)數(shù)
操作：向瓊脂平板中央加樣液0.1ml，涂布棒涂勻
關(guān)鍵：稀釋、加樣（0.1ml，誤差）、平板干濕度、涂布、涂布棒殘留、平行）
平行：為了提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、科學(xué)性，計(jì)數(shù)操作時(shí)每個(gè)梯度需最少做兩個(gè)平板，即最少一個(gè)平行。