微生物實驗之霉菌的形態(tài)觀察

發(fā)布時間：

2022-12-27

作者：

預填裝培養(yǎng)基平板

微生物實驗之霉菌的形態(tài)觀察

實驗目的和內容

目的:了解霉菌形態(tài),掌握微生物載玻片濕室培養(yǎng)方法.

內容:霉菌載玻片濕室培養(yǎng).

曲霉,青霉,根霉,毛霉形態(tài)觀察.

根霉假根的觀察.

實驗材料和用具

產黃青霉(Penicfilliumchrysogenum),黑曲霉(Aspergillusniger),黑根霉(Rhizopusnigrians),總狀毛霉(Mucorracemosus)等斜面菌種.

半固體PDA培養(yǎng)基,乳酸苯酚固定液,棉藍染色液,20%甘油;

透明膠帶,剪刀,培養(yǎng)皿,載玻片,口形玻棒擱架,蓋玻片,圓形濾紙片,細口滴管,鑷子,顯微鏡,接種環(huán).

操作步驟

霉菌的載玻片濕室培養(yǎng)

可4人合作,每人制作一霉菌的載玻片.

1．準備濕室在培養(yǎng)皿底鋪一張圓形濾紙片,其上放一“冂”形載玻片擱架,在擱梁上放一塊載玻片和兩塊蓋玻片,蓋上皿蓋,外用紙包扎,經12l攝氏度濕熱滅菌30分鐘后,置60攝氏度烘箱中烘干,備用.

2．接種用接種環(huán)挑取少量待觀察的霉菌孢子至濕室內的載玻片上,每張載玻片可接同一菌種的孢子兩處.接種時只要將帶菌的接種環(huán)在載玻片上輕輕碰幾下即可(務必記住接種的位置).

3．加培養(yǎng)基用無菌細口滴管吸取少量融化約60攝氏度的培養(yǎng)基,滴加到載玻片的接種處,培養(yǎng)基應滴得圓而薄,其直徑約為0.5厘米(滴加量一般以l/2小滴為宜).

4．加蓋玻片在培養(yǎng)基未徹底凝固前．用無菌鑷子將皿內蓋玻片蓋在瓊脂塊薄層上,用鑷子輕壓,使蓋玻片和載玻片間的距離相當接近,但不能壓扁,否則不透氣.

5．倒保濕劑每皿倒大約3mL20%的無菌甘油,使皿內的濾紙完全潤濕,以保持皿內濕度,皿蓋上注明菌名,組別和接種日期.此為制成的載玻片濕室,置28攝氏度恒溫培養(yǎng)3至5d.

黑根霉假根的培養(yǎng)

將融化的PDA培養(yǎng)基,冷卻至50攝氏度倒入無菌平皿,其量約為平皿高度的l/2.冷凝后,用接種環(huán)沾取根霉孢子,在平板表面劃線接種.然后將平皿倒置,在皿蓋內放一無菌載玻片,于28攝氏度培養(yǎng)2至3d后,可見根霉的氣生菌絲倒掛成胡須狀,有許多菌絲與載玻片接觸,并在載玻片上分化出假根和匍匐菌絲等結構.

鏡檢觀察

1．濕室培養(yǎng)霉菌鏡檢載玻片從培養(yǎng)16至20h開始,通過連續(xù)觀察,可了解孢子的萌發(fā),菌絲體的生長分化和子實體的形成過程.將濕室內的載玻片取出,直接置于低倍鏡和高倍鏡下觀察曲霉,青霉,毛霉,根霉等霉菌的形態(tài),重點觀察菌絲是否分隔,曲霉和青霉的分生孢子形成特點,曲霉的足細胞,根霉和毛霉的孢子囊和孢囊孢子.繪圖.

2．粘片觀察取一滴棉藍染色液置于載玻片中央,取一段透明膠帶,打開霉菌平板培養(yǎng)物,粘取菌體,粘面朝下,放在染液上.鏡檢.

3．假根觀察將培養(yǎng)根霉假根的平皿打開,取出皿蓋內的載玻片標本,在附著菌絲體的一面蓋上蓋玻片,置顯微鏡下觀察.只要用低倍鏡就能觀察到假根及從根節(jié)上分化出的孢子囊梗,孢子囊,孢囊孢子和兩個假根間的匍匐菌絲,觀察時注意調節(jié)焦距以看清各種構造.

4．制成永久裝片把觀察到霉菌形態(tài)較清晰,完整的片子,制成標本作較長期保存.制備方法是,輕輕揭去蓋玻片,如果載玻片上有瓊脂,仔細挑去,然后滴加少量乳酸苯酚固定液,蓋上清潔蓋玻片,在蓋玻片四周滴加樹膠封固.

注意事項

載玻片濕室培養(yǎng)時,蓋玻片不能緊貼載玻片,要彼此有極小縫隙,一是為了通氣；二是使各部分結構平行排列,易于觀察.

實驗報告

繪制鏡檢形態(tài)圖

1．毛霉和根霉形態(tài)圖,示各部.

2．青霉和曲霉形態(tài)圖,示各部

載玻片觀察記錄

菌種	菌絲體（氣生菌絲、營養(yǎng)菌絲的粗細、色澤、菌絲有隔或無隔等）	無性孢子特征（孢子梗的分化特征，孢子著生特征等）	其他特征結構（有無假根、足細胞匍匐菌絲、囊軸等）