常用培養(yǎng)基配方二 培養(yǎng)基的配置
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
細(xì)菌檢測(cè)用增菌檢測(cè)用
21 過(guò)氧化物酶試驗(yàn)
試劑:2%兒茶酚溶液.
3%過(guò)氧化氫溶液.
試驗(yàn)方法:挑取固體培養(yǎng)基上菌落一接種環(huán),置于潔凈試管內(nèi),滴加2%兒茶酚溶液1mL及3%過(guò)氧化氫溶液1mL.靜置于室溫(20℃)中30～60min,觀察結(jié)果.
結(jié)果:陽(yáng)性反應(yīng),細(xì)菌變?yōu)楹诤稚?陰性反應(yīng),細(xì)菌不變色.
注:過(guò)氧化物酶的作用可受氰化鉀的抑制.
22 磷酸鹽緩沖液
儲(chǔ)存液
磷酸二氫鉀 34g
1mol/L氫氧化鈉溶液 175mL
蒸餾水 825mL
pH7.2
制法:先將磷酸鹽溶解于500mL蒸餾水中,用1mol/L氫氧化鈉溶液校正pH后,再用蒸餾水稀釋至1000mL.
稀釋液:取儲(chǔ)存液1.25mL,用蒸餾水稀釋至1000mL.分裝每瓶100mL或每管10mL,121℃高壓滅菌15min.
23明膠磷酸鹽緩沖液
成分:
明膠 2g
磷酸氫二鈉 4g
蒸餾水 1000mL
pH6.2
制法:加熱溶解,校正pH,121℃高壓滅菌15min.
24 乳酸-苯酚溶液
成分:
苯酚 10g
乳酸(比重1.21) 10g
甘油 20g
蒸餾水 10mL
制法:將苯酚在水中加熱溶解,然后加入乳酸及甘油.
用途:檢驗(yàn)真菌形態(tài)時(shí)用.
25 肉浸液肉湯
成分:
絞碎牛肉 500g
氯化鈉 5g
蛋白胨 10g
磷酸氫二鉀 2g
蒸餾水 1000mL
制法:將絞碎之去筋膜無(wú)油脂牛肉500g加蒸餾水1000mL,混合后放冰箱過(guò)夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小時(shí),使肉渣完全凝結(jié)成塊,用絨布過(guò)濾,并擠壓收集全部濾液,加水補(bǔ)足原量.加入蛋白胨,氯化鈉和磷酸鹽,溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并過(guò)濾,分裝燒瓶,121℃高壓滅菌30min.26肉浸液瓊脂
成分:
肉浸液肉湯(PH7.4) 1000mL
瓊脂 17～20g
制法:加熱溶化瓊脂,分裝燒瓶或試管,121℃高壓滅菌30min.根據(jù)需要,傾注平板或放成斜面.
27牛肉(或牛心)消化湯
成分:
絞碎牛肉(或牛心) 1000g
15%氫氧化鈉溶液 27mL
胰蛋白酶 40mL
三氯甲烷 1mL
氯化鈉 10g
蒸餾水 2000mL
制法:
1 稱取碎牛肉,加蒸餾水,隔水加熱到80℃,維持15min.
2 加氫氧化鈉溶液,對(duì)pH試紙呈弱堿性,冷至40℃.
3 加胰蛋白酶,氯仿,在36±1℃放置4～5h,每小時(shí)搖動(dòng)一二次.
4 4h后,吸取上層液5mL于試管中,加5%硫酸銅溶液0.1mL,4%氫氧化鈉溶液5mL,混合之.若呈紅色,則不須再消化,可由溫箱取出.
5 加入15%乙酸溶液45mL,對(duì)pH試紙呈酸性.
6 煮沸15min,使胰蛋白酶破壞,冷后,放冰箱內(nèi)一夜.
7 次日吸取上層清液,加氯化鈉10g,并加水補(bǔ)足原量,煮沸.
8 校正pH7.4～7.6(加15%氫氧化鈉溶液約10mL),加熱,用濾紙過(guò)濾,分裝燒瓶,121℃高壓滅菌20min.
注:①此培養(yǎng)基可作為瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ),不需加蛋白胨.
②胰蛋白酶之配制:稱取去脂絞碎的豬胰500g,加入乙醇500mL,蒸餾水1500mL,混合之,裝人玻塞瓶?jī)?nèi).每日搖勻三次.3d后,用絨布過(guò)濾擠出其汁,加鹽酸至0.05%,放冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?
28血消化湯
成分:
絞碎豬胃 100g
絞碎豬血塊 100g
蒸餾水 1000mL
濃鹽酸 10mL
制法:
1 洗滌豬胃,除去油脂,保留胃粘膜,用絞肉機(jī)絞碎.
2 用絞肉機(jī)將豬血塊絞碎.
3 將蒸餾水加熱至55℃,加入豬胃,豬血塊和鹽酸,置55℃水浴中24h,時(shí)常加以搖動(dòng).
4 從水浴內(nèi)取出,加入1moL/L碳酸鈉溶液5mL,煮沸10min,置于冰箱內(nèi)一夜.
5 吸取上層清液,加磷酸氫二鉀1g,加熱至75℃,加入1mol/L碳酸鈉溶液45mL,煮沸,校正pH7.2～7.4.
6用濾紙過(guò)濾,分裝燒瓶,121℃高壓滅菌20min.
29豆粉瓊脂
成分:
牛心消化湯(PH7.4～7.6) 1000mL
瓊脂 20g
黃豆粉浸液 50mL
制法:將瓊脂加在牛心消化湯內(nèi),加熱溶解,過(guò)濾.加入豌豆粉浸液,分裝每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min.
豌豆粉浸液制法:取豌豆粉5g,氯化鈉10g,加入蒸餾水100mL.置100℃水浴內(nèi)加熱1h,放于冰箱中過(guò)夜.吸取上清液即為豌豆浸液.
30血瓊脂
成分:
pH7.4～7.6豆粉瓊脂 100mL
脫纖維羊血(或兔血) 5～10mL
制法:加熱溶化瓊脂,冷至50℃,以滅菌手續(xù)加入脫纖維羊血,搖勻,傾注平板.亦可分裝滅菌試管,置成斜面.亦可用其他營(yíng)養(yǎng)豐富的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制血瓊脂.
31營(yíng)養(yǎng)瓊脂
成分:
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化鈉 5g
瓊脂 15～20g
蒸餾水 1000mL
制法:將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi),加入15%氫氧化鈉溶液約2mL,校正pH至7.2～7.4.加入瓊脂,加熱煮沸,使瓊脂溶化.分裝燒瓶,121℃高壓滅菌15min.
注:此培養(yǎng)基可供一般細(xì)菌培養(yǎng)之用,可傾注平板或制成斜面.如用于菌落計(jì)數(shù),瓊脂量為1.5%;如作成平板或斜面,則應(yīng)為2%.
32營(yíng)養(yǎng)肉湯、
成分:
蛋白陳 10g
牛肉膏 3g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,分裝燒瓶,每瓶225mL,121℃高壓滅菌15min.
33 乳糖膽鹽發(fā)酵管
成分:
蛋白胨 20g
豬膽鹽(或牛,羊膽鹽) 5g
乳糖 10g
0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:將蛋白胨,膽鹽及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示劑,分裝每管10mL,并放入一個(gè)小倒管,115℃高壓滅菌15min.
注:雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外,其他成分加倍.
34乳糖發(fā)酵管
成分:
蛋白胨 20g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:將蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示劑,按檢驗(yàn)要求分裝30mL,10mL或3mL,并放入一個(gè)小倒管,115℃高壓滅菌15min.
注:①雙料乳糖發(fā)酵管除蒸餾水外,其他成分加倍.
②30mL和10mL乳糖發(fā)酵管專供醬油及醬類檢驗(yàn)用,3mL乳糖發(fā)酵管供大腸菌群證實(shí)試驗(yàn)用.
35 EC肉湯
成分:
胰蛋白胨 20g
3號(hào)膽鹽(或混合膽鹽) 1.5g
乳糖 5g
磷酸氫二鉀 4g
磷酸二氫鉀 1.5g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
制法:將上述成分混合,溶解后,分裝有發(fā)酵倒管的試管中,121℃高壓滅菌15min,最終pH為6.9±0.2.
36 緩沖蛋白胨水(BP)
成分:
蛋白胨 10g
氯化鈉 5g
磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O) 9g
磷酸二氫鉀 1.5g
蒸餾水 1000mL
pH7.2
制法:按上述成分配好后以大燒瓶裝,121℃高壓滅菌15min.臨用時(shí)無(wú)菌分裝每瓶225mL.
注:本培養(yǎng)基供沙門氏菌前增菌用.
甲液
胰蛋白胨 5g
氯化鈉 8g
磷酸二氫鉀 1.6g
蒸餾水 1000mL
乙液
氯化鎂(化學(xué)純) 40g
蒸餾水 100mL
4.13.3 丙液
0.4%孔雀綠水溶液.
制法:分別按上述成分配好后,121℃高壓滅菌15min備用.臨用時(shí)取甲液90mL,乙液9mL,丙液0.9mL,以無(wú)菌操作混合即可.
注:本培養(yǎng)基亦稱Rappaport 10(R10)增菌液.
基礎(chǔ)培養(yǎng)基
多胨或眎胨 5g
膽鹽 1g
碳酸鈣 10g
硫代硫酸鈉 30g
蒸餾水 1000mL
碘溶液
碘 6g
碘化鉀 5g
蒸餾水 20mL
制法:將基礎(chǔ)培養(yǎng)基的各成分加入蒸餾水中,加熱溶解,分裝每瓶100mL.分裝時(shí)應(yīng)隨時(shí)振搖,使其中的碳酸鈣混勻.121℃高壓滅菌15min備用.臨用時(shí)每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入碘溶液2mL,0.1%煌綠溶液1mL.
39 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(換用方法)
基礎(chǔ)液:
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
氯化鈉 3g
碳酸鈣 45g
蒸餾水 1000mL
將各成分加入于蒸餾水中,加熱至約70℃溶解,校正pH至7.0±0.1,121℃高壓滅菌20min.
硫代硫酸鈉溶液
硫代硫酸鈉(Na2S2O3·5H2O) 50g
蒸餾水加至100mL
碘溶液
碘片 20g
碘化鉀 25g
蒸餾水加至 100mL
將碘化鉀充分溶解于是少量的蒸餾水中,加入碘片,振搖玻瓶至碘片全部溶解,再加入蒸餾水至規(guī)定量.貯于棕色玻瓶?jī)?nèi),緊塞瓶蓋備用.
煌綠水溶液
煌綠 0.5g
蒸餾水 100mL
存放暗處,不少于1d,使其自然滅菌.
牛膽鹽溶液
干燥的牛膽鹽 10g
蒸餾水 100mL
煮沸溶解,121℃高壓滅菌20min.
制備:
基礎(chǔ)液 900mL
硫代硫酸鈉溶液 100mL
碘液 20mL
煌綠溶液 2mL
牛膽鹽溶液 50mL
臨用前,按上列順序,以無(wú)菌操作依次加入于基礎(chǔ)液中,每加入一種成分,均應(yīng)搖勻后再加入另一種成分.分裝于滅菌瓶中,每瓶100mL.
40 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)
成分:
蛋白胨 5g
乳糖 4g
亞硒酸氫鈉 4g
磷酸氫二鈉 5.5g
磷酸二氫鉀 4.58
L-胱氨酸 0.01g
蒸餾水 1000mL
1%L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法:稱取L-胱氨酸0.1g(或DL-胱氨酸0.2g),加1mol/L氫氧化鈉1.5mL,使溶解,再加入蒸餾水8.5mL即成.
制法:將除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸餾水中,加熱煮沸,俟冷備用.另將亞硒酸氫鈉溶解于100mL蒸餾水中,加熱煮沸,候冷,以無(wú)菌操作與上液混合.再加入1%L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液1mL.分裝于滅菌瓶中,每瓶100mL,pH應(yīng)為7.0±0.1.
41 GN增菌液
成分:
胰蛋白胨 20g
葡萄糖 1g
甘露醇 2g
檸檬酸鈉 5g
去氧膽酸鈉 0.5g
磷酸氫二鉀 4g
磷酸二氫鉀 1.5g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.0
制法:按上述成分配好,加熱使溶解,校正pH.分裝每瓶225mL,115℃高壓滅菌15min.
42 腸道菌增菌肉湯
成分:
蛋白胨1 10g
葡萄糖 5g
牛膽鹽 20g
磷酸氫二鈉 8g
磷酸二氫鉀 2g
煌綠 0.015g
蒸餾水 1000mL
pH7.2
制法:按上述成分配好,加熱使溶解,校正pH.分裝每瓶30mL,115℃高壓滅菌15min.
43 亞硫酸鉍瓊脂(BS)
成分:
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
葡萄糖 5g
硫酸亞鐵 0.3g
磷酸氫二鈉 4g
煌綠 0.025g
檸檬酸鉍銨 2g
亞硫酸鈉 6g
瓊脂 18～20g
蒸餾水 1000mL
pH7.5
制法:
1 將前面5種成分溶解于300mL蒸餾水中.
2 將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解.
3 將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解,冷至80℃
4 將以上三液合并,補(bǔ)充蒸餾水至1000mL,校正pH,加0.5%煌綠水溶液5mL,搖勻.冷至50～55℃,傾注平皿.
注:此培養(yǎng)基不需高壓滅菌.制備過(guò)程不宜過(guò)分加熱.以免降低其選擇性.應(yīng)在臨用前一天制備,貯存于室溫暗處.超過(guò)48h不宜使用.
44 DHL瓊脂
成分:
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
去氧膽酸鈉 1g
硫代硫酸鈉 2.3g
檸檬酸鈉 1g
檸檬酸鐵銨 1g
中性紅 0.03g
瓊脂 18～20g
蒸餾水 1000mL
pH7.3
制法:將除中性紅和瓊脂以外的成分溶解于400mL蒸餾水中,校正pH. 再將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解,兩液合并,并加入0.5%中性紅水溶液6mL,待冷至50～55℃,傾注平板.