銅綠假單胞菌的檢查技術(shù)
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
即用型培養(yǎng)基采購(gòu)批發(fā)
銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)的檢查
(1)增菌培養(yǎng)稱取供試品1g,加到9毫升的NAC液體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)18至24小時(shí).
(2)特異培養(yǎng)將上述增菌液搖勻,取0.1毫升滴加到NAC瓊脂平皿上,以玻棒涂勻,一式3份,培養(yǎng)18至24.小時(shí),觀察菌落生長(zhǎng)情況.
(3)結(jié)果判定
陽(yáng)性對(duì)照平皿應(yīng)長(zhǎng)出產(chǎn)綠色色素的菌落,可使整個(gè)培養(yǎng)基呈綠色.
如平皿上無(wú)菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落與陽(yáng)性對(duì)照菌落形態(tài)特征不符,判供試品未檢出銅綠假單胞菌;如平皿生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征相符或疑似,應(yīng)挑選2至3個(gè)菌落,分別接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面上,培養(yǎng)18至24小時(shí).取斜面培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢及氧化酶試驗(yàn),鑒別是否為制品中的目的菌或銅綠假單胞菌.
氧化酶試驗(yàn)
取潔凈濾紙片置于平皿內(nèi),用無(wú)菌玻棒取斜面培養(yǎng)物涂于濾紙片上,滴加新配制的1%二鹽酸二甲基對(duì)苯二胺試液,在30秒內(nèi)若培養(yǎng)物呈粉紅色并逐漸變?yōu)樽霞t色為氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性,否則為陰性.
若斜面培養(yǎng)物為非革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌或氧化酶試驗(yàn)陰性,均判供試品未檢出銅綠假單胞菌.否則,應(yīng)進(jìn)行綠膿菌素試驗(yàn).
綠膿菌素(Pyocyanin)試驗(yàn)
取斜面培養(yǎng)物接種于PDP瓊脂培養(yǎng)基斜面上,培養(yǎng)24小時(shí),加三氯甲烷3至5毫升至培養(yǎng)管中,攪碎培養(yǎng)基并充分振搖.靜置片刻,將三氯甲烷相移至另一試管中,加入1mol/L鹽酸試液約1毫升,振搖后,靜置片刻,觀察.若鹽酸溶液呈粉紅色,為綠膿菌素試驗(yàn)陽(yáng)性,否則為陰性.同時(shí)用未接種的PDP瓊脂培養(yǎng)基斜面同法作陰性對(duì)照,陰性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)呈陰性.
若上述疑似菌為革蘭氏陰性桿菌、氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性及綠膿菌素試驗(yàn)陽(yáng)性,判供試品檢出銅綠假單胞菌;若上述疑似菌為革蘭氏陰性桿菌、氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性及綠膿菌素試驗(yàn)陰性,應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn),確認(rèn)是否為銅綠假單胞菌.