真菌的檢驗(yàn)法
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
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真菌的檢驗(yàn)法
真菌的一般檢驗(yàn)法為直接鏡檢觀(guān)察是否有菌絲、孢子或菌體,檢出循環(huán)抗原等.直接鏡檢對(duì)真菌病診斷很重要,尤其對(duì)威脅生命的真菌病,快速、準(zhǔn)確的非培養(yǎng)診斷法是非常必要的.
不染色標(biāo)本直接鏡檢除部分深部感染真菌可初步確定菌種外,大部分淺部感染真菌僅能確定真菌菌絲和有無(wú)孢子,很難確定為何種真菌感染.
準(zhǔn)備材料:標(biāo)本.甲屑、皮屑、毛發(fā)等固體標(biāo)本;膿汁、尿沉渣、分泌物等液體標(biāo)本.
試劑.100g/lNaOH或KOH溶液;生理鹽水.
其他.小鑷子、蓋玻片、載玻片.
檢驗(yàn)方法:
制片方法:將甲屑、皮屑、毛發(fā)等固體標(biāo)本置滅菌潔凈載玻片上,加一滴封固劑(100g/lNaOH或KOH溶液),蓋上蓋玻片,微加熱使角質(zhì)軟化,輕壓蓋玻片,使標(biāo)本變薄、透明,并驅(qū)除氣泡.膿汁、尿沉渣、分泌物等標(biāo)本僅用無(wú)菌生理鹽水稀釋即可.
檢驗(yàn)方法:先用低倍顯微鏡檢查,當(dāng)查到可疑為真菌孢子或菌絲時(shí),再換高倍鏡檢查,觀(guān)察記錄菌絲和孢子.許多標(biāo)本不需染色即可直接鏡檢.如觀(guān)察分生孢子的發(fā)育需放大1000倍.有些結(jié)構(gòu)如分生孢子梗上產(chǎn)生的瓶梗需用相差顯微鏡才看得清楚.某些病原性真菌如莢膜組織胞漿菌、皮炎芽生菌、粗球孢子菌感染病人標(biāo)本中,直接檢出與這些病原菌形態(tài)特征符合的真菌時(shí),結(jié)合臨床表現(xiàn)容易作出明確診斷.如果檢出的是正常菌群,要確定其病原性比較困難.在酸中毒的糖尿病病人暴發(fā)急性感染時(shí),如檢出寬或波形不分隔的菌絲則應(yīng)考慮毛霉菌病.直接檢出的結(jié)果也有助于實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步診斷,有助于采取恰當(dāng)?shù)臋z驗(yàn)步驟和措施(如選擇特殊的培養(yǎng)基和確定適宜的孵育時(shí)間).但是,直接檢查也有其局限性,因?yàn)殛幮越Y(jié)果也不能排除真菌感染,直接檢查不如培養(yǎng)法敏感,其敏感性也隨標(biāo)本類(lèi)型、數(shù)量、采集時(shí)間和質(zhì)量等而有不同;也有假陽(yáng)性結(jié)果,溶解的淋巴細(xì)胞在腦脊液印度墨汁濕片中易誤認(rèn)為新型隱球菌;脂肪微滴也可能與出芽酵母細(xì)胞混淆.出現(xiàn)可疑結(jié)果時(shí)應(yīng)進(jìn)行復(fù)查,或采用其他檢驗(yàn)步驟.除花斑癬病原菌培養(yǎng)有困難只能依據(jù)直接鏡檢診斷外,一般標(biāo)本應(yīng)進(jìn)一步作培養(yǎng)檢查.
