光合菌的分離與保藏
發(fā)布時(shí)間：
2022-12-27
作者：
光合菌的分離與保藏
培養(yǎng)光合細(xì)菌首先要有菌種.目前,應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的光合細(xì)菌,主要是紅螺菌科即紫色非硫細(xì)菌中的一些種類.它們共同的特征是具鞭毛,能運(yùn)動(dòng),不產(chǎn)生氣泡,細(xì)胞內(nèi)不積累硫磺.光合細(xì)菌分離成功的關(guān)鍵在于選擇適宜的富集、分離培養(yǎng)基,和提供適于光合細(xì)菌生長(zhǎng)需要的厭氣環(huán)境及適宜的溫度、光照條件.
一采樣
紅螺菌科細(xì)菌可用有機(jī)物作為光合作用的供氫體兼碳源,廣泛分布在被有機(jī)物污染的地方,如河底、湖底、海底、水田、溝渠和污水塘的泥土以及豆制品廠、淀粉廠和食品工業(yè)
等廢水排水溝處呈橙黃色或粉紅色的泥土中.淺水處直接用杯舀取少量泥土作樣品,深水處借用采水器和采泥器采樣.
二富集培養(yǎng)
富集培養(yǎng)均采用液體培養(yǎng)基.將采回的樣品(土壤或水)裝入玻璃圓筒或大型試管或具塞的磨口玻璃瓶中,倒入配制好的培養(yǎng)液,充分?jǐn)嚢?為造成厭氣環(huán)境,在玻璃圓筒或大型
試管中加入液體石蠟以隔斷空氣.然后在溫度為25至35,光照為5000至10000lx的條件下進(jìn)行富集培養(yǎng),經(jīng)過(guò)2至8周的培養(yǎng),在玻璃瓶壁上出現(xiàn)光合細(xì)菌菌落,或整個(gè)培養(yǎng)液長(zhǎng)成紅色.如果培養(yǎng)的光合細(xì)菌是海水種,因其生長(zhǎng)緩慢則需要更長(zhǎng)的富集時(shí)間.
如果富集培養(yǎng)初步獲得成功,就用吸管插入菌液中或光合細(xì)菌大量繁殖的泥層中,將菌液吸入具塞的磨口玻璃瓶中,加入培養(yǎng)液繼續(xù)進(jìn)行光照；厭氣培養(yǎng).反復(fù)多次后,光合細(xì)菌
壓倒其他細(xì)菌而占絕對(duì)優(yōu)勢(shì),培養(yǎng)液吳深紅色.這時(shí)富集培養(yǎng)成功.為了避免培養(yǎng)液中藻類和綠桿菌科細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖,可用濾光片,使波長(zhǎng)為800nm或更長(zhǎng)波長(zhǎng)的光透過(guò),可以更有效地達(dá)到富集紫色非硫細(xì)菌的目的.
此外,培養(yǎng)紫色非硫細(xì)菌時(shí),用含氯化物的培養(yǎng)基比用合硫酸鹽的培養(yǎng)基效果好.
三分離方法
富集培養(yǎng)成功后可進(jìn)行分離培養(yǎng).淡水生長(zhǎng)的紫色非硫細(xì)菌生長(zhǎng)速度較快,在1周左右移植比較合適,而海水生長(zhǎng)的紫色非硫細(xì)菌生長(zhǎng)速度較慢,培養(yǎng)3周以上才能移植.先配制固體培養(yǎng)基,滅菌后澆成平板.將富集培養(yǎng)成功的菌液適當(dāng)稀釋,在平板劃線,然后在厭氣、光照條件下培養(yǎng).培養(yǎng)溫度為25至35,光照為2000至3000lx,培養(yǎng)2至7天左右,就能長(zhǎng)出光合細(xì)菌菌落.仔細(xì)挑取單菌落,繼續(xù)用上述方法分離培養(yǎng).反復(fù)多次,便能得到紫色非硫細(xì)菌的純培養(yǎng)物.