微生物檢查培養(yǎng)基的滅菌方法
發(fā)布時間：
2022-12-27
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微生物檢查培養(yǎng)基的滅菌方法
滅菌是指用物理或化學(xué)的方法,殺死物體表面和孔隙內(nèi)的一切微生物或生物體,即把所有生命的物質(zhì)全部殺死.常用的滅菌方法可分為物理的和化學(xué)的兩類:物理方法如干熱(烘燒和灼燒)、濕熱(常壓或高壓蒸煮)、射線處理(超聲波、微波)、過濾、清洗和大量無菌水沖洗等措施.化學(xué)方法是使用升汞、甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學(xué)藥品處理等.
微生物檢查培養(yǎng)基常用的滅菌方法主要是濕熱滅菌和過濾除菌.
1、濕熱滅菌:
蒸汽在冷凝時釋放出大量潛能,并且蒸汽具有強大穿透力,蒸汽的濕熱破壞菌體蛋白質(zhì)和核酸的化學(xué)鍵,使酶失活,微生物因代謝障礙而死亡.濕熱滅菌的效果,取決于致死溫度和致死時間.致死溫度是殺滅微生物的極限溫度.致死時間是在致死溫度下殺滅全部微生物所需時間.
高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌.培養(yǎng)基分裝后應(yīng)立即滅菌,應(yīng)在當(dāng)天內(nèi)完成滅菌工作,不可過夜.消毒時間不宜過長,也不能超過規(guī)定的壓力范圍,否則有機物質(zhì)就會在高溫下分解,失去營養(yǎng)作用,也會使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色,甚至難以凝固.
培養(yǎng)基配制后,應(yīng)按驗證過的高壓滅菌程序滅菌.2015版《中國藥典》第三次公示稿,1106非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查:控制菌檢查法中,列出部分培養(yǎng)基的滅菌條件,如下表所示:
培養(yǎng)基名稱
滅菌條件
腸道菌增菌液體培養(yǎng)基:加熱至100攝氏度30分鐘,立即冷卻
紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基:加熱煮沸(不能在高壓滅菌器中加熱)
RV沙門菌增菌液體培養(yǎng)基:滅菌溫度不能超過115攝氏度
木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基:加熱至沸騰(不能在高壓滅菌器中加熱)
其他未明確標(biāo)示滅菌方法的培養(yǎng)基,按供應(yīng)商標(biāo)簽所示滅菌方法滅菌或按驗證過的高壓滅菌程序滅菌.
2、過濾除菌:
一些抗生素及有機物等,遇熱容易分解,不能與培養(yǎng)基一起進(jìn)行高溫滅菌,而要使用細(xì)菌過濾器濾去其中的雜菌,例如含抗生素的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基.過濾后的溶液要立即加入培養(yǎng)基中,若為液體培養(yǎng)基,可在培養(yǎng)基冷卻至30攝氏度時加入;若為固體培養(yǎng)基,必須在培養(yǎng)基凝固之前(50-60攝氏度)加入,振蕩使溶液與其他成分混合均勻.