掌握微生物實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的單染色法的研究
發(fā)布時(shí)間：
2022-11-16
作者：
國內(nèi)細(xì)菌微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)
細(xì)菌的單染色法的研究
一、基本原理
所謂單染色法是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色的一種方法.此法操作簡便,適用于菌體一般形態(tài)的觀察.
在中性、堿性或弱酸性溶液中,細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷,所以常用堿性染料進(jìn)行染色.堿性染料并不是堿,和其他染料一樣是一種鹽,電離時(shí)染料離子帶正電,易與帶負(fù)電荷的細(xì)菌結(jié)合而使細(xì)菌著色.例如,美藍(lán)(亞甲藍(lán))實(shí)際上是氯化亞甲藍(lán)鹽(methylenebluechloride,縮寫為MBC),它可被電離成正、負(fù)離子
MBC→methylene blue++chloride-
帶正電荷的染料離子可使細(xì)菌細(xì)胞染成藍(lán)色.常用的堿性染料除美藍(lán)外,還有結(jié)晶紫(crystal violet)、堿性復(fù)紅(basicfu-chsin)、番紅(又稱沙黃,safranine)等.
細(xì)菌體積小,較透明,如未經(jīng)染色常不易識(shí)別,而經(jīng)著色后,與背景形成鮮明的對(duì)比,使易于在顯微鏡下進(jìn)行觀察.
二、實(shí)驗(yàn)器材
顯微鏡,酒精燈,載玻片,接種環(huán),雙層瓶,擦鏡紙,生理鹽水;
呂氏堿性美藍(lán)染色液,石炭酸復(fù)紅染色液;
金黃色葡萄球菌,枯草芽孢桿菌.
三、實(shí)驗(yàn)操作步驟
步驟1：涂片 取兩塊干凈的載玻片,各滴一小滴生理鹽水于載玻片中央,用無菌操作,分別挑取金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌于二載玻片的水滴中(每一種菌制一片),調(diào)勻并涂成薄膜.注意滴生理鹽水時(shí)不宜過多,涂片必須均勻.
步驟2.干燥 于室溫中自然干燥.
步驟3.固定 涂片面向上,于火焰上通過2至3次,使細(xì)胞質(zhì)凝固,以固定細(xì)菌的形態(tài),并使其不易脫落.但不能在火焰上烤,否則細(xì)菌形態(tài)將毀壞.
步驟4.染色 放標(biāo)本于水平位置,滴加染色液于涂片薄膜上,染色時(shí)間長短隨不同染色液而定.呂氏堿性美藍(lán)染色液約染2至3分鐘,石炭酸復(fù)紅染色液約染1至2分鐘.
步驟5.水洗 染色時(shí)間到后,用自來水沖洗,直至沖下之水無色時(shí)為止.注意沖洗水流不宜過急,過大,水由玻片上端流下,避免直接沖在涂片處.沖洗后,將標(biāo)本晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干,待完全干燥后才可置油鏡下觀察.
步驟6.鏡檢:進(jìn)行顯微鏡觀察.
金黃色葡萄球菌增菌培養(yǎng)基:胰蛋白胨大豆肉湯（TSB）